NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒 NobleRyder 即用型液體試劑 P2815-250TNobleRyder 即用型液體試劑 P2815-500T
紫外法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
蛋白質(zhì)分子中存在含有共軛雙鍵的lao氨酸、se氨酸、苯bing氨酸，使蛋白質(zhì)在270～290nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其中l(wèi)ao氨酸的最大吸收峰為275nm，se氨酸的最大吸收峰為280nm，苯bing氨酸的最大吸收峰為257nm。在上述波長(zhǎng)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測(cè)定。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒優(yōu)點(diǎn)是：操作迅速、簡(jiǎn)便，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點(diǎn)是與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中l(wèi)ao氨酸、se氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì)，準(zhǔn)確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | P2815 250T | P2815 500T | Storage |
試劑(A): 蛋白稀釋液(10×) | 50ml | 100ml | RT |
試劑(B): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA) | 2×20mg | 3×20mg | RT |
使用說(shuō)明書 | 1份 | ||
自備材料：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀
2、 96孔板或離心管
操作步驟(僅供參考)：
1、 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×，即為蛋白稀釋工作液。取1支20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入20ml蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，-20℃保存。
2、 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿，在280nm處以第1管作為調(diào)零點(diǎn)，分別檢測(cè)各管吸光度，以A280為縱坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
試管號(hào) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3.0 | 4.0 |
蛋白稀釋工作液(ml) | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 1.5 | 1.0 | 0 |
蛋白濃度(mg/ml) | 0 | 0.125 | 0.250 | 0.375 | 0.500 | 0.625 | 0.750 | 1.000 |
取1ml待測(cè)蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A280。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的蛋白濃度。
3、 Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對(duì)于含有核酸的蛋白質(zhì)，無(wú)需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn)，取1ml待測(cè)蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A280 和A260。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算出待測(cè)樣品的蛋白濃度，如果蛋白濃度過(guò)高應(yīng)用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測(cè)。
蛋白質(zhì)濃度(g/L)=1.45×A280-0.74×A280
4、 Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對(duì)于蛋白質(zhì)含量較少的溶液，適用于該法。取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點(diǎn)，取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定A215 和A225。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A215-A225)為縱坐標(biāo)，以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測(cè)出未知樣品的吸收差，即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。或者不用制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接按照如下經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：
蛋白質(zhì)濃度(g/L)=144×(A215-A225)。
注意事項(xiàng)：
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20℃保存。
2.待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
3.如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。
4.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期： 12個(gè)月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
