DNA退火緩沖液
本Annealing Buffer可以用于DNA oligo退火，不可用于RNA oligo 的退火。退火后產(chǎn)物可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。
DNA退火緩沖液
D0110 DNA退火緩沖液 NobleRyder 5ml 80.00
本公司供應(yīng)化學(xué)試劑的DNA退火緩沖液，*，歡迎洽談。
簡介：本Annealing Buffer可以用于DNA oligo退火，不可用于RNA oligo 的退火。退火后產(chǎn)物可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接。通常轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽性克隆。
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
操作步驟
1. 把要退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的三蒸水配制成50μM。解凍Annealing Buffer for DNA Oligos（5X），混勻備用。如經(jīng)常使用，本Buffer可放置2-8℃一個月。
2. 如下設(shè)置退火反應(yīng)體系：
Annealing Buffer for DNA Oligos（5X） | 20μl |
DNA oligo A（50μM） | 20μl |
DNA oligo B（50μM） | 20μl |
Nuclease-Free Water | 40μl |
總體積 | 100μl |
按照上述順序依次加入各種試劑，混勻。放入PCR儀。
3. 如下設(shè)置PCR儀進(jìn)行退火反應(yīng)：
步驟 | 溫度 | 時間 | 說明 |
1 | 95℃ | 2分鐘 | 讓oligo充分變性 |
2 | 每8秒下降0.1℃，降至25℃（注1） | 約90分鐘 | 退火 |
3 | 4℃ | 長時間保持 | 暫時存放 |
注1：如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能，也可以設(shè)置為每90秒下降1℃。
4. 退火結(jié)束后可以直接用于連接反應(yīng)，也可以在-20℃凍存?zhèn)溆谩Ｈ绻嘶鸾Y(jié)束后打算進(jìn)行酶切等其它反應(yīng)，用純化試劑盒進(jìn)行純化，或者確保退火產(chǎn)物在反應(yīng)體系中體積不超過10%，以避免AnnealingBuffer對后續(xù)的酶反應(yīng)體系的干擾。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 品牌 | 規(guī)格 | 價格（元） |
D0963 | 2×Pfu PCR MasterMix （不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
D0962 | 2×Pfu PCR MasterMix （含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 160.00/1200.00 |
D0961 | 2×Taq PCR MasterMix （不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
D0960 | 2×Taq PCR MasterMix（含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 80.00/580.00 |
D0965 | 2×Taq Plus PCR MasterMix （不含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
D0964 | 2×Taq Plus PCR MasterMix （含染料） | NobleRyder | 1ml/10ml | 120.00/1000.00 |
D0110 | DNA退火緩沖液 | NobleRyder | 5ml | 80.00 |
D0973 | dNTP（10mM） | NobleRyder | 1ml | 80.00 |
D0974 | dNTP（2.5mM） | NobleRyder | 1ml | 40.00 |
D0951 | Pfu DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 180.00/720.00 |
D0033 | SYBR Green I（20×）定量PCR用 | NobleRyder | 1ml | 120.00 |
R0928 | SYBR Green II（10000×） | NobleRyder | 100ul | 520.00 |
D0950 | Taq DNA Polymerase | NobleRyder | 1000U/5000U | 80.00/320.00 |
D0952 | Taq Plus DNA Polymerase | NobleRyder | 500U/2500U | 140.00/560.00 |
