使用abcam抗體時有哪些知識點需要我們知道的
更新時間：2021-04-07 點擊次數(shù)：2215次
如果要用abcam抗體對活細胞進行染色或處理，或者要用抗體進行體內(nèi)研究，請務(wù)必使用不含疊化鈉的制備物。這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用：它會阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
疊化鈉會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng)，因此必須在進行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。完成偶聯(lián)反應(yīng)之后，可使用疊化鈉保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% *(硫柳汞)，這種物質(zhì)不含伯胺。
抗體溶液中的氮化鈉可通過滲析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da)，疊化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴散出去，而抗體得以保留。
滲析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上，溫度保持 4 ℃)進行，每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS，攪拌滲析裝置 6 小時。更換 PBS 兩次，每次更換后均攪拌至少 6 小時。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌，并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。
反復(fù)凍融可能使抗體變性，導致抗體形成聚集體，從而降低其結(jié)合能力。
對大部分抗體而言，在 -20 ℃ 下保存就已足夠;在 -80 ℃ 下保存并無明顯優(yōu)勢。應(yīng)避免使用無霜冰箱，因為此類冰箱的凍融循環(huán)(用于減少霜的形成)正是保存此類抗體需要避免的。
出于相同的原因，應(yīng)將抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動小的區(qū)域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱門架上。
有些研究人員向抗體中加入冷凍保護劑甘油(終濃度為 50%)以防止凍融損壞;甘油可將冷凝點降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方法可用于多種抗體，但我們僅對少數(shù)幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩(wěn)定性進行了測試，我們僅擔保遵循數(shù)據(jù)表建議進行保存的抗體的性能。
我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因為該溫度低于甘油的冷凝點。請注意，甘油可能會被細菌污染。如果加入了甘油或任何冷凍保護劑，應(yīng)當小心操作，確保獲得無菌制備物。
