北京諾博萊德科技有限公司

 　　DNA提取是Qiagen試劑盒的一大經典應用，之前的文章中我們有介紹過Qiagen試劑盒提取總RNA的操作過程，本文介紹下Qiagen試劑盒用于提取DNA的準備工作。

　　Qiagen試劑盒適用于使用微型離心機或真空處理從全血、血漿、血清、血沉、淋巴細胞以及體液樣品中提取總(基因、線粒體和病毒)DNA。該試劑盒可處理帶有EDTA、檸檬酸鹽和肝素等常規抗凝劑的新鮮或冷凍的全血樣本，樣品量可達200μl。整套基因組的操作時間約為20–40分鐘，一般可從200μl健康全血中獲得4–12 μg DNA，洗脫體積可在50–200μl范圍。

　　Qiagen試劑盒的抽提原理：

　　樣品中的DNA可以特異性結合到QIAamp的硅膠膜上，通過兩次洗滌可以將PCR抑制劑，如：二價陽離子和蛋白*去除，zui后結合在離心柱上的純核酸可用水或試劑盒中的緩沖液進行洗脫收集。

　　Qiagen試劑盒提取DNA開始前的準備工作：

　　1. 將樣品平衡到室溫(15-25℃);

　　2. 將水浴或是金屬浴加熱到56℃，以備第4步使用;

　　3. 將Buffer AE或蒸餾水平衡到室溫，用于第11步的洗脫;

　　4. 確保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已經按照說明配置完畢;

　　5. 如果在Buffer AL中出現沉淀物，請在56℃孵育使其溶解。

　　開始前的注意事項：

　　1. 所以的離心步驟需要在室溫(15-25℃)進行;

　　2. 如果樣品中含有的基因組當量少于10000，請添加載體DNA(carrier DNA);

　　3. 200μl全血樣品可以得到約3-12μgDNA。